Entomologia forense : identificação genética de espécies em Portugal

Abstract

A Entomologia Forense, consiste no estudo da interacção de insectos e outros artrópodes com questões legais. Pode ser dividida em: urbana, referente a produtos alimentares e médico-legal. Em Entomologia Forense a investigação criminal pode beneficiar dos métodos moleculares de genotipagem, como a identificação do cadáver através do conteúdo gástrico larvar ou a identificação genética da espécie, de uma prova entomológica. Este estudo teve como objectivos: a comparação de diferentes métodos de extracção de DNA, utilizados em Entomologia Forense Molecular, a análise das principais diferenças, relativas à ocorrência de espécies encontradas em distintas condições ambientais e climáticas em cadáveres humanos, em Portugal e a elaboração de uma base de dados entomológicos. O DNA dos 314 espécimes que fizeram parte deste estudo e dos conteúdos gástricos larvares, foi extraído através de diferentes processos, de modo a possibilitar a comparação entre métodos. Para o estudo de microssatélites humanos, a partir do conteúdo gástrico larvar, foi utilizado um sistema multiplex. Na reacção de amplificação para DNA mitocondrial foram utilizados primers específicos para as diferentes regiões estudadas (citocromo b e citocromo oxidase I). Os diferentes métodos de extracção de DNA utilizados não aparentaram revelar diferenças significativas entre si. Contudo, o método de extracção orgânica foi o que demonstrou maior sensibilidade nas amostras utilizadas para análise do conteúdo gástrico larvar (obtenção de DNA humano). Foram identificadas um total de oito espécies, sendo que a maior diversidade de espécies foi encontrada em cadáveres cujo aparecimento ocorreu durante os meses que apresentavam temperaturas elevadas. Relativamente aos diferentes habitats, foi observada uma maior diversidade de espécies em cadáveres encontrados em espaço aberto. Este estudo não inclui todas as espécies que poderão ser encontradas num cadáver, mas poderá ser representativo da ocorrência das principais espécies de interesse forense em Portugal, pois constitui o início de uma base dados entomológicos.

Forensic entomology consists in the study of the interaction of insects and other arthropods with legal issues. It can be divided into three subcategories – the urban, questions relating to food stuffs, and medico-legal. In forensic entomology, criminal investigations can benefit from the use of molecular methods of genotyping, such as the identification of cadavers from the larval gastric contents or the genetic identification of species of entomological evidences. This study’s objectives were: to compare different methods of DNA extraction used in the field of molecular forensic entomology; to analyse the principal differences in the occurrence of species encountered in human cadavers in Portugal depending on the environmental and climatic conditions; and to develop a related entomological database. The DNA of the 314 specimens that made up this study and the larvae gastric contents was extracted using various different processes in such a way as to allow compariso between the different methods. A multiplex system was used for the study of human microsatellites through the gastric larval contents. For the amplification of mitochondrial DNA specific primers were used relating to the different regions studied (cytochrome b e cytochrome oxidase I). No significant differences were shown between the different methods of DNA extraction used. However, the method of organic extraction was the one that demonstrated greatest sensitivity in the samples used for analyses of larval gastric contents (in terms of the human DNA obtained). In all, a total of eight species were identified among which the greatest diversity of species were found in cadavers which arose in the months characterised by the highest temperatures. In relation to different habitats, the largest diversity of species was found in cadavers located in open spaces. This study does not include all the species that can be found in cadavers but it does document the occurrence of the principal species of forensic interest in Portugal and thus can constitute the beginnings of an entomological database.