Desenvolvimento e validação de uma metodologia analítica por HPLC-FD para determinação dos metabolitos de PaHs em cefalópodes

Abstract

O consumo de peixe e frutos do mar é considerado um elemento importante de uma dieta humana equilibrada. Os cefalópodes representam um dos mais importantes grupos capturados na Europa e sendo assim, várias questões com o seu consumo têm surgido devido ao risco da exposição a poluentes químicos. Os Hidrocarbonetos Aromáticos Policíclicos (PAHs), omnipresentes poluentes orgânicos formados, naturalmente ou antropogenicamente, devido a combustão incompleta de qualquer material que contém carbono, estão incluídos na lista prioritária de poluentes da União Europeia e Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (US EPA) devido às suas propriedades mutagénicos e carcinogénicos. Na determinação dos seus derivados monohidroxílicos resultante da metabolização, o 1-hidroxipireno tem surgido como um biomarcador biológico para a dose de pireno e um indicador indireto para todos os PAHs. Uma vez que os cefalópodes são expostos a estes contaminantes, estes organismos foram relatados como uma importante via de exposição humana. A análise de PAHs e dos seus metabolitos em amostras de alimentos continua a ser uma tarefa desafiadora. Neste estudo, foi desenvolvido e validado um método preciso e sensível para a determinação de 3 metabolitos hidroxilados de PAHs (1-hidroxinaftaleno, 2-hidroxifluoreno e 1-hidroxipireno) em amostras de cefalópodes. A análise foi realizada por extração, hidrólise enzimática e cleanup por extração em fase sólida (SPE) e determinação por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) com deteção por fluorescência (FD). A metodologia analítica otimizada mostrou-se sensível, exata e precisa com percentagens de recuperação entre 62 a 110% e limites de deteção de 227, 9 e 46 ng g-1 para o 1-OH-NF, 2- OH-Fl e 1-OH-P, respetivamente, tendo, posteriormente, sido aplicada à análise de 18 amostras reais oriundas do Sudoeste e Noroeste Atlântico. Níveis variáveis de 1-OH-NF (786-1145 ng g-1) foram detetados nas amostras analisadas. Nenhuma das amostras continha quantidades detetáveis de 2-OH-Fl e 1-OH-P, o biomarcador usado para avaliar a ocorrência e os efeitos cancerígenos de PAHs em alimentos.

The consumption of fish and seafood is considered an important part of a balanced diet. Among seafood species, cephalopods represent one of the most important captured groups in Europe. This being true, concern with their consumption has arisen due to the risk derived from exposure to chemical pollutants. The Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs), omnipresent naturally formed organic pollutants, naturally or anthropogenically, due to incomplete combustion of any material containing organic, are included in the priority list of pollutants of the European Union and United States Environmental Protection Agency (US EPA) due to their mutagenic and carcinogenic properties. Important substances associated with PAHs are their monohydroxilics derivatives generated as a result of the PAH metabolic process. 1-hydroxypyrene was proposed as a biological biomarker for the pyrene dose and an indirect indicator for all PAHs. Since cephalopods are exposed to PAHs, these organisms have been reported as a major route of human exposure. The PAHs analysis and their metabolites in samples of food continue to be a challenging task. A precise and sensitive method for determining the presence of 3 hydroxylated metabolites of PAHs (1-hydroxynaphthalene, 2-hydroxyfluorene and 1-hydroxypyrene) in samples of cephalopods has been validated. The analysis was performed through extraction, enzymatic hydrolysis and cleanup by solid-phase extraction (SPE) and determination by highperformance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection (FD). The optimized analytical methodology was sensitive, accurate and precise with recovery rates between 62 to 110% and detection limits of 227, 9 and 46 ng g-1 for the 1-OH-NF, 2-OH-Fl and 1-OH-P, respectively, having subsequently been applied to the analysis of real samples from 18 of the Southwest and Northwest Atlantic. Varying levels of 1-OH-NF (786-1145 ng g-1) were detected in the samples analyzed. None of the samples contained detectable quantities of 2-OH-Fl and 1-OH-P, the biomarker used to evaluate the occurrence and carcinogenicity of PAHs in food.