Deteção dos protozoários Giardia lamblia e Cryptosporidium sp. em saladas pré-embaladas

Abstract

As saladas pré-embaladas, prontas para consumo, são cada vez mais procuradas pelos consumidores, por serem de fácil e rápida utilização, não necessitando de processamento, com um cariz muito prático que motiva a aquisição pelos consumidores em geral. As contaminações microbianas estão muitas vezes associadas ao consumo de saladas e são responsáveis pela grande parte das doenças transmitidas por alimentos. Como exemplos, destacam-se as parasitoses intestinais, provocadas por diversos parasitas, nomeadamente Giardia lamblia e Cryptosporidium sp.. Estes parasitas são transmitidos pela via fecal-oral, por contacto direto entre indivíduos infetados ou animal-pessoa ou indiretamente através da ingestão de água e alimentos contaminados. Os quistos de Giardia sp e ooquistos de Cryptosporidium sp. são muito resistentes às condições do meio ambiente e também aos tratamentos efetuados à água para consumo humano, podendo permanecer durante muito tempo no meio-ambiente, contaminando a água, solos e posteriormente os alimentos. Em Portugal não está descrita a pesquisa destes parasitas em alimentos. Assim, este estudo teve como objetivo detetar Giardia sp. e Cryptosporidium sp. em saladas pré-embaladas e prontas a consumir, aplicando técnicas de biologia molecular, de modo a conhecer o nível de contaminação das saladas. Foram adquiridas, aleatoriamente, 24 amostras de saladas de três marcas diferentes e de vegetais variados, durante o período de junho a setembro de 2015 em hipermercados de Coimbra. A extração do ADN foi realizada utilizando o kit comercial QIAamp DNA Stool mini kit (Quiagen), e a deteção de Giardia lamblia e Cryptosporidium sp. foi realizada através de técnicas de PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e nested-PCR. O limite de deteção de Giardia lamblia e Cryptosporidium sp. das técnicas de PCR foi determinado e a identificação das espécies/genótipos foi realizada por sequenciação. O parasita G. lamblia foi detetado em uma amostra de salada e por sequenciação foi identificado como genótipo A (100% homologia com Portland-1). O limite de deteção na técnica de nested-PCR foi de 30,5 pg/ml de ADN. Não foi identificado Cryptosporidium sp. em nenhuma amostra de salada e o limite de deteção foi de 1 ooquisto na técnica de qPCR e 100 ooquistos na técnica nested-PCR. Conclui-se, portanto, que é necessário estabelecer medidas de prevenção e controlo destes parasitas em todo o setor de produção, processamento, embalamento e transporte das saladas pré-embaladas e prontas para consumo humano.

The ready-to-eat salads are in increasing demand by consumers because they are easy and quick to use and do not require processing, have a practical nature that motivate the purchase by consumers in general. Microbial contaminations are often associated with consumption of salads and are responsible for foodborne diseases. Among the foodborne diseases, there are the intestinal parasitosis caused by various parasites, including, Giardia lamblia and Cryptosporidium sp.. These parasites are transmitted by the fecal-oral route, by direct contact between infected humans or animal-person or indirectly through ingestion of water and food contaminated. The cysts of Giardia sp. and oocysts of Cryptosporidium sp. are very resistant to environmental conditions and also to water treatments for human consumption and remain for a long time in the environment, contaminating water, soil and subsequently the food. In Portugal, research of these parasites in food is not described. This study aimed to detect Giardia sp. and Cryptosporidium sp. in ready-to-eat salads, applying techniques of molecular biology in order to study the level of contamination in salads. Twenty four samples of ready-to-eat salads of three different brands and assorted vegetables were randomly purchased during the period June to September 2015, in hypermarkets of Coimbra. The DNA extraction was performed using the commercial kit QIAamp DNA Stool mini kit (Qiagen), and the detection of Giardia sp. and Cryptosporidium sp. was performed using real-time quantitative PCR (qPCR) and nested-PCR techniques. The limit of detection of the PCR techniques was determined and the identification of species/genotypes was performed by sequencing. G. lamblia parasite was detected in one salad sample and was identified as genotype A by sequencing (100% sequence homology with Portland-1). The limit of detection of nested-PCR was about 30.5 pg / ml DNA. Cryptosporidium sp. was not identified in any salad and the detection limit was of 1 oocyst in qPCR and 100 oocysts in nested-PCR. In conclusion, it is necessary establish prevention and control measures for these parasites throughout the manufacturing industry, processing, packaging and transport of ready-to-eat salads for human consumption.