Validação de uma metodologia analítica para a determinação de fluoxetina e norfluoxetina em mexilhões (Mytillus galloprovincialis)

Abstract

Os inibidores seletivos da recaptação da serotonina (SSRIs) estão entre os medicamentos mais prescritos no mundo e estão presentes em diferentes áreas do ambiente. Existem alguns métodos analíticos confiáveis e específicos para a deteção e quantificação de SSRIs em amostras ambientais. A maioria dos métodos referidos envolve procedimentos de limpeza que geralmente utilizam a extração em fase sólida (SPE) seguida de cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa em tandem (LC/MSn). Neste trabalho procedeu-se ao desenvolvimento e validação de uma metodologia analítica para a determinação de Fluoxetina (FLU) e do seu metabolito norfluoxetina (norFLU) em mexilhões (Mytillus galloprovincialis). A FLU e a norFLU foram extraídas das amostras de mexilhões utilizando acetonitrilo 0,1% ácido fórmico, purificadas com colunas Oasis MCX e quantificadas por LC-MS-MS. As recuperações foram de 79,05% e 80,73% para a FLU para níveis de fortificação de 5 ng mL-1 e 50 ng mL-1, respetivamente. Para a norFLU, a 5 ng mL-1, a recuperação foi de 70,78 % e a 50 ng ml-1 foi de 67,99%. As amostras para os ensaios de exposição foram colhidas na Ria Formosa, Portugal. Estas amostras foram colocadas em aquários, separados tratando-se de grupo controlo ou de exposição, a 75 ng L-1 de fluoxetina. A diferentes períodos de tempo (0, 3, 7, e 15 dias) foram removidos dos aquários mexilhões dos grupos controlo e de exposição. Nas amostras expostas, a frequência de FLU registada foi de 70, 80 e 100% para os 3, 7 e 15 dias, respetivamente. A frequência da norFLU foi mais baixo para os 3 e 7 dias de exposição, 10 e 50% respetivamente. Em 15 dias de exposição a frequência de norFLU foi 100%.

Selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI) antidepressants are among the most prescribed pharmaceuticals worldwide and are ubiquitous in different areas of the environment. There are few reliable and specific analytical methods for the detection and quantification of SSRIs in environmental samples. The majority of the reported methods generally involve cleanup procedures that usually employ solid-phase extraction (SPE) followed by liquid chromatography with tandem mass spectrometry detection (LC/MSn). This work was made in order to develop and validate an analytical methodology for the determination of fluoxetine (FLU) and it metabolite norfluoxetine (norFLU) in mussels (Mytillus galloprovincialis). The FLU and norFLU were extracted from the mussel samples using acetonitrile 0.1% formic acid, purified with Oasis MCX column and quantified by LCMS- MS. Recoveries were 79.05% and 80.73% for FLU from spiked to 5 ng ml-1 and 50 ng ml-1, respectively. For norFLU, 5 ng mL-1, the recovery was 70.78%, and 50 ng ml-1 was 67.99%. Samples for testing exposure were collected in Ria Formosa, Portugal. These samples were placed in separate tanks in the case of the control group or exposure to fluoxetine 75 ng L-1. At different periods (0, 3, 7 and 15 days) mussels were removed from the aquária. Were not detected levels of FLU or norFLU in control samples. In the exposed samples, the frequency of FLU was recorded at 70, 80 and 100% for the 3, 7 and 15 days of exposure, respectively. The frequency of norFLU was lower for 3 and 7 days exposure, 10 and 50% respectively. At 15 days of exposure the frequency of norFLU was 100%.