Desenvolvimento de uma vacina oral contra giarda lamblia

Abstract

Giardia lamblia é o parasita mais comum em todo mundo, responsável por vários distúrbios intestinais, principalmente diarreia e síndrome de má absorção. A infeção por Giardia tem um impacto adverso sobre o crescimento infantil e desenvolvimento psicomotor. Dado ser uma infeção que afeta a população a nível mundial, a comunidade científica tem apostado no desenvolvimento de uma vacina que previna esta doença, de modo a diminuir a sua incidência e proteger a população. Desta forma, com este projeto pretendeu-se desenvolver uma vacina oral baseada na encapsulação de um antigénio deste parasita, β-giardina, em nanopartículas de quitosano revestidas por alginato de sódio de forma a torná-las resistentes à sua passagem pelo estômago e, assim, chegarem ao seu alvo intactas. A primeira parte do trabalho consistiu na preparação das nanopartículas e sua caracterização. Numa segunda fase, as nanopartículas carregadas com o antigénio foram administradas a murganhos fêmea e pesquisaram-se os níveis de anticorpos totais e específicos no soro, lavagens intestinais, lavagens vaginais e fezes. Os efeitos in vitro dos lavados intestinais e do soro na aderência e morfologia do parasita foram também avaliados. Neste trabalho obteve-se uma eficácia de encapsulamento do antigénio de β-giardina de 100 %. Através do método de ELISA verificou-se a presença de IgG específica anti-β-giardina no soro e aumento do seu título após reforços. Observou-se igualmente uma concentração de IgA total maior nos animais imunizados que no grupo controlo. Nos lavados intestinais detetaram-se concentrações elevadas de IgA total, no entanto não foi possível detectar IgG e IgA específicas anti-β-giardina. Relativamente aos estudos in vitro, os lavados intestinais inibiram a aderência do parasita em 7 %. A vacina desenvolvida, baseada em nanopartículas de quitosano revestidas com alginato e carregadas de antigénio β-giardina, induziu uma resposta imunológica adaptativa nos animais em estudo. Houve produção de anticorpos ao nível da mucosa intestinal e no soro, nomeadamente IgA e IgG. Os resultados obtidos nos testes de aderência indicam uma inibição da aderência do parasita potencialmente devido aos anticorpos presentes nos lavados intestinais

Giardia lamblia is the most common protozoan parasite worldwide, responsible for several intestinal disorders, particularly diarrhea and malabsortion syndrome. Giardia infection have an adverse impact on child growth and psychomotor development. Since it is an infection that affects the population worldwide, the scientific community has focused on developing a vaccine to prevent this disease in order to reduce its incidence and protect the population. Thus, with this project we intended to develop an oral vaccine based on encapsulating an antigen of this parasite, the β-giardin, in nanoparticles of chitosan-coated sodium alginate in order to make them resistant to their passage through the stomach and, thereby, reach their target intacts. The first step of this work is the preparation and characterization of nanoparticles. In a second step, nanoparticles loaded with the antigen were administered to female mice and researched levels of total and specific antibodies in the serum, intestinal washes, vaginal washes and stool. The in vitro effects of washed intestinal and serum in adhesion and morphology of the parasites were also evaluated. This work we obtained an encapsulation efficiency of antigen β-giardin 100 %. Through ELISA method verified the presence of anti-β-giardina-IgG specific in serum and increases its degree after boosts. There was also a greater concentration of the total IgA in immunized animals in the control group. However, the results were not conclusive about the quantification of specific IgG and IgA anti-β-giardin in washed intestinal. However, in vitro studies showed that washed intestinal of immunized animals inhibited the parasite adherence (7 %). The vaccine developed, based on chitosan nanoparticles coated with alginate and loaded β-giardin antigen, managed to trigger an adaptative immune response in animals. The IgA and IgG antibody production was increased at the level of the intestinal mucosa and serum. The results of the adhesion assays indicate an inhibition of the parasite adherence, potentially due to antibodies present in intestinal washed